Mix-n-Stain?抗體標記常見問題

1、 標記的原理是化學性質的還是物理性質的？

答：標記的原理是化學性質的，也就是說染料是通過共價化學鍵的方式與抗體之間進行結合?；瘜W共價鍵的結合方式能夠確保在多重染色的情況下，多種被不同CF染料標記試劑盒標記的抗體之間不會發生染料重分布和遷移。

2、 如果沒有純化步驟，我怎么能確保在使用過程中，那些未被連接到抗體上的多余的染料不會對下游試驗造成影響？

答：這個問題涉及到我們產品創新，染料獨一無二的制備，加上緩沖體系以及標記的原理過程可非常完美的解決這個問題。使用Mix-n-Stain標記試劑盒，您絕不用擔心這個問題。至于詳細的機理過程正是我們獨創的專利保護技術，恕不能公布。

3、 蛋白與染料的標記的最佳配比是多少？

答：在試劑盒推薦的樣品量范圍內，無需計算染料的用量和反應時間，只需直接把樣品加入標記。只需要把你的抗體樣品與CF染料在提供的小管里加上反應緩沖液進行混合標記，就可以得到非常理想的標記效果。傳統的標記試劑盒在使用時就必須要計算好染料與蛋白抗體的反應配比，以確保不會過染或染色不充分。過染會導致熒光淬滅，丟失抗體的特異性結合位點等，以致會使能檢測到的熒光信號大大減弱。這些問題在Mix-n-Stain標記試劑盒標記過程中，都不用擔心，因為在染料的特性和反應緩沖體系已完美的解決了這些問題。

4、 能夠使用Mix-n-Stain試劑盒標記除抗體以外的蛋白質嗎？

答：Mix-n-Stain主要是針對抗體而設計的，不推薦使用Mix-n-Stain標記其他非抗體的蛋白。

5、 如何確定加入抗體的濃度？

答：Mix-n-Stain試劑盒推薦的抗體濃度是0.5~1.0mg/ml。如果你的抗體初始濃度太低，你可以低速離心的方法進行離心處理或者凍干法處理進行濃縮。如果你的抗體濃度高于這個范圍的話，你可以使用1X的PBS稀釋。推薦濃度以外的抗體初始濃度將可能導致過染或者染色不飽和，會直接影響結果。

6、染色的整個過程需要花費多長時間？

答：加樣時間大約是30秒，也就是取決于你的操作。之后放置30分鐘的時間進行染色反應，整個過程就完成了。你可以馬上使用前面已經標記好的抗體進行下一步試驗，比如顯微觀察，流式細胞術和WB分析等。如果要把標記好的抗體進行長期保存，我們推薦使用試劑盒自帶的保存液進行保存，適當的保存條件至少可以保存6個月。

7、試劑盒反應緩沖體系可以兼容哪些抗體緩沖體系？

答：試劑盒反應緩沖體系可以兼容的緩沖體系有PBS、HEPES、MES、MOPS以及硼酸鹽緩沖體系。緩沖體系中的含有20mM的Tris 也是可以兼容的，但當Tris濃度高于20mM的時候推薦使用前面提到的凍干法或者離心法進行清潔處理。

8、標記反應液兼容腹水，血清或者腫瘤細胞培養液嗎？

答：不能，強烈要求在標記反應前，使用清潔步驟去除這些不必要的介質。

9、 標記好的抗體穩定性怎么樣？

答：如果使用Mix-n-Stain提供的保存液，于4℃或者更低的溫度下可以至少保存3個月。如果要更長時間的保存，推薦溫度為-20℃。跟其他的標記試劑盒比如Invitrogen的Zenon相比，CF-抗體偶合物是通過化學鍵的方式結合，而非物理方式結合，因此具有高度的穩定性。