GelRed?/GelGreen?常見問題

1、 Marker分辨率低的主要原因？

Marker的加樣量：marker有一個推薦濃度范圍，選擇最高的，樣品與Marker含量差別大, 也會造成條帶錯誤（這不會是染料的問題，用EB也會存在該問題）。正確的DNA上樣量是條帶清晰的保證。Marker應該選擇在目標片段大小附近的梯帶較密的，這樣比對才準確。另外注意的是，Marker的電泳條件也要符合DNA電泳的操作標準: 如果選擇λDNA/EcoR I的酶切marker，需要預先65℃加熱5min，冰上冷卻后使用。從而避免Hind Ⅲ或EcoR I酶切造成的粘性接頭導致的片段連接不規則或條帶信號弱等現象。

凝膠不平整：梳子不干凈有污染，加樣孔不平整也會影響圖的效果；

電泳條件：電壓不穩，電泳時間不超過1h。電壓過高，會導致小片段跑出膠，出現條帶缺失現象。

緩沖液：TBE的緩沖能力更強，如果緩沖液緩沖性能下降，會導致DNA電泳條帶模糊，不規則遷移等。TAE建議換成TBE效果更好。另外建議配膠時的緩沖液和電泳緩沖液是同時配制。

染色劑：GelRed（312nm激發UV成像）無毒，性價比高，靈敏度比傳統EB高10倍以上，注意觀察凝膠時應根據染料不同，使用合適的光源和激發波長，如果激發波長不對，條帶出現模糊等情況。

2、 GelRed / GelGreen安全性如何？

GelRed/ GelGreen經過埃姆斯AMS和相關測試，已經被證明是替代EB和SYBR染料更為安全的產品。不過，請使用這些試劑時，也要遵循實驗室安全條例等。

3、GelRed / GelGreen的結合機制是什么？

 GelRed/ GelGreen作用原理通過靜電及電荷相互作用的結合。

4、GelRed / GelGreen檢測下限是什么？
GelRed/ GelGreen是超敏感的染料。有些用戶反饋可以檢測含量＜0.1ng的DNA。然而，染色的靈敏度取決于儀器的性能和曝光設置等。

5、為什么有GelRed和GelGreen兩種溶劑（二甲基亞砜DMSO和水）？在DMSO和水中的染料是否存在差異？

水溶解的產品與儲存在DMSO中的產品比較，是一個全新的改良。由于DMSO會被皮膚吸收，我們建議染料溶于水，以避免處理二甲基亞砜存在的潛在危害。鑒于有些用戶不希望改變實驗方案，我們將繼續提供儲存在DMSO的染料。經過內部測試，兩種溶劑方案的效果相似。

6、可以重新融化GelRed / GelGreen凝膠，再制備嗎？

是的，但最好再添加一些染料，保證重新制備凝膠的信號強度。

7、可以提前制作GelRed / GelGreen凝膠，儲存供以后使用嗎？
GelRed和GelGreen染料是穩定的。在保證瓊脂糖凝膠的完整性不會被破壞的前提下，你可以將預制的GelRed / GelGreen凝膠儲存供以后使用。我們建議在4℃避光貯存凝膠。

8、用那些儀器檢測GelRed和GelGreen？
GelRed完美兼容標準（302或312nm）紫外透射成像儀。
GelGreen的吸光度在250-300 nm和吸收峰在500納米左右。GelGreen兼容254 nm的紫外透射或可見光激發的凝膠成像儀，如Dark Reader或488 nm凝膠激光掃描儀。

9、GelRed和GelGreen可以用來染色單鏈DNA或RNA嗎？
GelRed和GelGreen可用于單鏈DNA和RNA的染色，但GelRed染單鏈核酸效果比GelGreen敏感5倍左右。使用熒光酶標儀的滴定實驗表明，GelRed綁定單鏈DNA和RNA熒光信號約是結合雙鏈DNA的一半左右。